1. 成果介绍

将小牛凝乳酶原进行全基因优化并使其在毕赤酵母中高效分泌表达。在3升小试水平表达量达到12000-15000 SU/ml（120-150 IMCU/mL），远高于国内外报道表达量，蛋白表达量约为3 mg/mL，而且无需甲醇诱导，全程发酵时间仅需94小时。重组凝乳酶性质与小牛皱胃凝乳酶基本一致（图19），生产的奶酪口感与小牛凝乳酶生产的相当。

图19 重组凝乳酶与天然凝乳酶酶学性质比较

2. 研发背景及市场应用前景

欧美发达国家对凝乳酶有巨大的市场需求。凝乳酶（chymosin）是制造干酪的凝乳过程中起凝乳作用的关键性酶,它是天冬氨酸蛋白酶中的一种，能够专一性裂解k-酪蛋白中的Phe105-Met106肽键，引起乳蛋白凝聚，在乳制品特别是干酪加工中具有重要作用。同时凝乳酶对干酪的质构和特有风味的形成起着非常重要的作用。传统的凝乳酶主要是通过宰杀未断奶小牛从其皱胃中提取，随着干酪产业的剧增，小牛皱胃提取的凝乳酶无法满足需求。市售植物和微生物来源的凝乳酶本质上是蛋白酶，由于对酪蛋白的过度水解，导致生产的奶酪口感差，酶制剂接受度不高。

3. 技术成熟度：可直接应用

4. 获得的知识产权情况

优化的牛凝乳酶原基因及其分泌表达方法和应用，ZL2013104219437,中国发明专利